一、样品料理及增菌 【TCD-022】ペニクリ女子校生と性転換女教師
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1.样品的料理
以无菌操作取样25g（mL）加入装有灭菌225mL志贺氏菌增菌肉汤的均质容器中，常用均质容器有均质杯、锥形瓶、均质袋。如图1-1。
a均质袋；b锥形瓶
图1-1均质容器
均质杯多用于不易融解的固体样品均质，可将固体样品切割搅动均匀；均质袋可置于拍击式均质器中均质固体，也常用于液体的均质；锥形瓶可置于摇床中，常用于液体的均质。
2.增菌
均质后的样品置于41.5℃±1℃，厌氧培养16h-20h。厌氧培养可使用厌氧培养箱、厌氧培养盒和厌氧培养袋（如图1-2-1）等。
a均质袋在厌氧袋中培养；b锥形瓶在厌氧袋中培养
图1-2-1厌氧袋培养
志贺氏菌在志贺氏增菌肉汤中滋长浑浊，如图1-2-2所示。
a空缺管；b福氏志贺氏菌ATCC12022；
c宋内志贺氏菌ATCC25931；d痢疾志贺氏菌CMCC51252
图1-2-2
二、志贺氏菌的分离
取增菌后的志贺氏增菌液分别划线接种于XLD琼脂平板和MAC琼脂平板或志贺氏显色培养基平板上，于36℃±1℃需氧培养20h-24h。若出现的菌落不典型或菌落较小不易不雅察，则持续培养至48h再进行不雅察。
1.XLD琼脂平板
志贺氏菌在XLD琼脂平板上的菌落特征为粉色至无色，半透明、光滑、湿润、圆形、旯旮整皆或不皆菌落（如图2-1所示）。志贺氏菌大多不发酵木糖、乳糖和蔗糖，可与发酵此三种糖类的细菌（如大肠黄色菌落）辞别；志贺氏菌不产硫化氢，可与产硫化氢的细菌（如大部分头陀等）辞别。
a福氏志贺氏菌ATCC12022；b宋内志贺氏菌ATCC25931；c痢疾志贺氏菌CMCC51252 【TCD-022】ペニクリ女子校生と性転換女教師
图2-1志贺氏菌在XLD琼脂平板上的滋长情况
2.MAC或志贺显色培养基
志贺氏菌在MAC琼脂平板上的菌落特征为微黄色菌落，半透明、光滑、湿润、圆形、旯旮整皆或不皆菌落（如图2-2-1所示）。志贺氏菌大多不发酵乳糖产碱，故菌落心思为黄色，可与发酵乳糖产酸（菌落心思为红色，或有胆盐千里淀环）的细菌辞别。部分宋内志贺氏菌渐渐发酵乳糖，若培养时辰过长会产生粉色菌落，稠浊后果。
a福氏志贺氏菌ATCC12022；b宋内志贺氏菌ATCC25931；c痢疾志贺氏菌CMCC51252
图2-2-1志贺氏菌在MAC琼脂平板上的滋长情况
志贺氏菌在志贺氏显色培养基平板上的菌落特征为白色或无色，半透明、光滑、湿润、圆形、旯旮整皆或不皆菌落（如图2-2-2所示），有些宋内志贺氏菌有蓝色中心。
a福氏志贺氏菌ATCC12022；b宋内志贺氏菌ATCC25931；c痢疾志贺氏菌CMCC51252
图2-2-2志贺氏菌在志贺氏显色培养基平板上的滋长情况
三、初步生化施行
自上述礼聘性平板上分别挑取2个以上典型或可疑菌落，分别接种三糖铁琼脂（TSI）、半固体和养分琼脂斜面一管，置于36℃±1℃需氧培养20h-24h。
1.三糖铁琼脂
志贺氏菌在三糖铁琼脂TSI中：
①斜面产碱呈红色且底层产酸呈黄色（发酵葡萄糖，不发酵乳糖、蔗糖），如图3-1-b、c、d；
②不产气（福氏志贺氏菌6型可产生小数气体），可对比图3-1-e产气后果进行判断；
③不产硫化氢，可对比3-1-f产硫化氢（可不雅察到玄色）后果进行判断。
a空缺管；b福氏志贺氏菌ATCC12022；c宋内志贺氏菌ATCC25931；
d痢疾志贺氏菌CMCC51252；e大肠埃希氏菌ATCC25922；f头陀氏菌ATCC14028
图3-1志贺氏菌在TSI琼脂斜面上的滋长情况
2.半固体培养基
志贺氏菌在半固体培养基中无能源，如图3-2-b、c、d所示，3-2-e、f为有能源菌株实验后果。
a空缺管；b福氏志贺氏菌ATCC12022；c宋内志贺氏菌ATCC25931；d痢疾志贺氏菌CMCC51252
e大肠埃希氏菌ATCC25922；f头陀氏菌ATCC14028
图3-2志贺氏菌在半固体琼脂上的滋长情况
志贺氏菌在半固体培养基中无能源，只沿穿刺线滋长；对比之下，大肠埃希氏菌和头陀氏菌在半固体培养基中有能源，在培养基中扩散滋长，不雅察培养基会发现穿刺线周围呈现“混浊”景况。
四、后续任性
敬佩适宜TSI和半固体培养基中志贺氏菌生化响应后果的可疑菌落，挑取其在已培养的养分琼脂斜面上滋长的菌苔，进行后续生化实验和血清学任性。
五、醒目事项
1、取检样时应保证无菌操作，幸免引入羞辱：①取样器用（药匙、枪头等）、均质容器无菌料理；②取样操作、后续接种操作在无菌环境中进行。
2、在礼聘均质容器时，除了要磋议均质容器的功能性，还要兼顾后续的厌氧培养条目能否杀青。如果配备厌氧培养箱，则可解放礼聘均质容器；若只可使用厌氧培养盒或厌氧培养袋，则需磋议到均质容器的大小等，以确保厌氧增菌能平日进行。
3、使用志贺氏增菌肉汤增菌时，需醒目培养温度为41.5℃±1℃且厌氧培养，主如果因为志贺氏菌在此条目下并在含有低浓度碳水化合物的培养基中滋长速率特别大肠菌群，以及志贺氏菌在提升温度时对壮盛霉素相对耐受。
3、TSI培养基要制成高层斜面，便于后续施行不雅察，高层斜面是指斜面与底层高度约2:3，即底部高约3cm，斜面长度2cm。
4、在进行半固体琼脂穿刺施行时，接种针不是总能沿穿刺旅途原路复返，导致穿刺阶梯会侧向扩大。进行后果不雅察时需醒目，半固体培养基的阳性后果是穿刺线周围的培养基会呈现“混浊”景况，即有菌的领略和滋长，不是单纯的侧向扩增。
5、部分不产硫化氢的头陀氏菌是志贺氏菌分离任性进程中的插手菌，其在XLD、MAC和志贺氏显色培养基上滋长景况同样，需持续进行后续实验才能将其辞别。
注：本文依据《GB 4789.5-2012 食物安寰球度标准 食物微生物教育 志贺氏菌教育》
注：本文属海博生物原创，未经允许不得转载。
附：食物中志贺氏菌的教育（下）-点击检察
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